摘要:
目的:改进气管上皮细胞的培养技术.方法: 采用胰酶冷消化加刮刷法分离兔气管上皮细胞,测定分离细胞的数量、纯度及成活率,并与机械剥离加酶消化法、酶温消化加刮刷法进行比较.同时比较无血清与有血清培养方法对上皮细胞纯度、融合时间的影响.结果:(1)胰酶冷消化加刮刷法分离所得上皮细胞的数量[(8.217±0.443)×106 cells/只]明显高于机械剥离加酶消化法[(2.198±0.533)×106 cells/只], P＜0.01;成活率(91.730%±1.532%)明显高于机械剥离加酶消化法(86.29%±0.46%)和胰酶温消化加刮刷法(83.07%±1.80%),均P＜0.05;纯度(94.08%±2.70%)接近机械剥离加酶消化法(97.02%±0.51%),P＞0.05,但明显高于胰酶温消化加刮刷法(88.900%±1.304%),P＜0.05.(2)无血清组在培养第3 d(95.0%±0.0%)、第5 d(95.3%±0.3%)、第7 d(95.3%±0.3%)气道上皮细胞纯度显著高于有血清组(90.1%±0.8%, 84.7%±1.6%和83.0%±0.9%),P＜0.01;且细胞生长融合时间(6-7 d)明显早于有血清组(12-14 d).结论: 胰酶冷消化加刮刷法是一种经济、简便、高效的兔气管上皮细胞体外分离培养方法,无血清培养可以提高培养上皮细胞的纯度,促进细胞融合.
