光敏生物素标记鸭瘟病毒核酸探针的制备及应用的研究

《广西农业大学学报》 贺东生[1];赵善昌[2]
摘要:
本试验研制了光敏生物素标记鸭瘟病毒全基因组核酸探针,对此探针的敏感性和特异性进行了研究。把提纯的鸭瘟病毒经蛋白酶消化后,提取核酸,核酸和光敏生物素经光标记后制成核酸探针。经亲和素—辣根过氧化物酶(AV-HRP)或碱性磷酸酶显色的核酸斑点杂交结果表明:该探针最低可检出10 pg(AV—AP法)同源的鸭瘟病毒F33—DNA或10-5稀释的攻毒鸭脑中的F33—DNA;用辣根酶系统显色,灵敏度要比碱性磷酸酶的低约10倍;该探针与鸭瘟弱毒、禽巴氏杆菌、鸭肝炎病毒、新城疫病毒、马立克氏病毒和正常鸭组织均不出现杂交信号,表明探针是敏感与特异的;探针在—18℃的保存期大于4个月;用探针检测21份病料,阳性率为90.5%(19/21),其中攻毒病料100%(7/7)被检出,而病毒分离—电镜法的检出率仅为75%(6/9)。杂交结果还显示了病鸭体内各组织含毒量的大小,依次是:脑>肝,脾>血,肾>肌肉。
鸭病 , 鸭瘟病毒 , 光敏生物素
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