摘要:
目的研究卵巢颗粒细胞特异性表达基因CYP19A1、抗苗勒管激素（AMH）、AMHR2的启动子区CpG岛位点甲基化水平，并分析甲基化与基因的表达是否具有相关性。方法收集体外受精一胚胎移植（IVF—ET）过程中剩余的颗粒细胞60例，其中包括维族多囊卵巢综合征（PCOS）患者的颗粒细胞30例和正常的维族女性颗粒细胞30例。采集研究对象的临床资料，行IVF前于卵泡期抽取静脉血测定基础激素指标[卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）、催乳素（PRL）]。于采卵后收集患者的卵泡液，ELISA法检测卵泡液中E2、雄烯二酮（A）、AMH水平。采用MSP技术对芯片筛选出来的甲基化差异基因CYP19A1、AMH、AMHR2的甲基化位点进行检测。同时采用Real—time PCR和Western blot技术检测这些基因的mRNA及蛋白质表达水平，采用Pearson correlation法计算这些基因的甲基化与表达的相关性。结果维族PCOS患者基础水平的LH、T、LH／FSH明显高于正常维族女性，E2／T明显低于正常维族女性。维族P—COS患者的卵泡液中A、AMH明显高于正常维族女性，E2／T明显低于正常维族女性。维族PCOS患者颗粒细胞中CYP19A1基因的甲基化水平高于正常维族女性，AMH和AMHR2基因的甲基化水平低于正常维族女性，差异有统计学意义（P〈0．05）。维族PCOS患者颗粒细胞中CYP19A1基因的表达水平低于正常维族女性，AMH和AMHR2基因的表达水平高于正常维族女性，这些基因的表达水平与其启动子的甲基化水平呈负相关（P〈0．05）。CYP19A1与AMH和AMHR2的mRNA表达呈负相关（P〈0．05）。结论维族PCOS患者颗粒细胞存在CYP19A1、AMH和AMHR2基因的甲基化改变，且这种改变与其对应分子的表达变化相关。CYP19A1甲基化水平与卵泡液E2／A比值相关，提示CYP19A1基因的甲基化抑制了芳香化酶的活性，使卵巢局部雄激素合成�
