摘要:
目的构建PinshRNA慢病毒载体，建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1（Pin1）表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体，构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体，随后转入人胚肾HEK293T细胞中，收集其上清进行病毒滴度测定，再行慢病毒的包装，将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR（qRT-PCR）及Westernblot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析，成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒，包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Westernblot法检测显示，与对照组相比，pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin1的表达。
