摘要:
背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗.本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用.方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMV△8.2、包膜基因质粒pCMV.VSVG、目的基因质粒pHR′CS.GFP或pHR′CS.CDglytk分两组(pHR′CS.Cdglytk为实验组、pHR′CS.GFP为对照组),经脂质体导人病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达.给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用.结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞.荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒.慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达.单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P＜0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P＜0.01).结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细胞的杀伤具有明显增强作用.
