摘要:
目的探讨联合应用靶向血管内皮生长因子（VEGF）小于扰RNA（siRNA）与双自杀基因yCDglyTK对人胃癌细胞的体外杀伤作用。方法以磷酸钙纳米颗粒为载体介导空白质粒pcDNA3．1（-）null（空白质粒组）、靶向VEGF的干扰质粒pGenesil—shVEGF（干扰质粒组）、双自杀基因质粒pcDNA3．1（-）CV-yCDglyTK（双自杀基因组）及联合基因质粒pcDNA3．1（-）shVEGF—yCDglyTK（联合基因组）转染胃癌SGC7901细胞，未转染的胃癌细胞为空白对照组，经G418筛选稳定转染的胃癌细胞株，采用RT—PCR和免疫印迹法验证目的基因表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）后，通过四甲基偶氮唑盐（MTT）生长曲线、旁观者效应实验、Hoechst33258染色及流式细胞术，观察各组细胞的生物学特性变化、凋亡细胞形态及凋亡率。采用SPSS13．0统计学软件进行数据处理分析，组间多重比较采用LSD检验。结果成功建立4种转染不同质粒的胃癌细胞株，联合基因组及双自杀基因组均可检测到双自杀基因yCDglyTK的表达。MTT生长曲线显示5-FC作用24h后，与空白对照组和空白质粒组相比，干扰质粒组、双自杀基因组及联合基因组吸光度值明显降低（P〈0．01）。当稳定转染联合基因的SGC7901细胞占60％、80％和100％时，细胞相对存活率分别为13．09％±2．40％、9．74％±2．83％及5．68％±1．03％。荧光显微镜下见双自杀基因组及联合基因组大量细胞呈现凋亡形态改变。流式细胞检测结果示干扰质粒组、双自杀基因组以及联合基因组的凋亡率分别为16．40％±4．68％、57．63％±4．96％及69．07％±4．69％，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论采用靶向VEGF siRNA与双自杀基因联合治疗可有效杀伤胃癌SGC7901细胞，诱导凋亡是其杀伤瘤细胞的重要机制之一。
