摘要:
目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinant human insulin-like growth factor-1,rhIGF-1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF-1生物制品.方法:蚕血淋巴中rhIGF-1初步提纯去除杂质,采用亲和层析法纯化rhIGF-1.以ELISA法测定纯化产物中rhIGF-1含量,用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性,4-甲基偶氮唑蓝(tetrazolium salt,MTT)法观察其对MCF-7细胞增殖的影响.结果:纯化后rhIGF-1纯度约为40%,Western blot分析发现,主要纯化产物相对分子质量为7.5 ku的成熟hIGF-1,所含非目的产物与hIGF-1无免疫交叉反应.细胞活性刺激实验显示,rhIGF-1纯品对MCF-7细胞有较好的刺激活性,促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品.结论:蚕血淋巴中的rhIGF-1经亲和层析后初步得到纯化,并显示良好的免疫学活性和生物学活性.
