摘要:
目的在大肠埃希菌中克隆表达鼠疫菌特异基因（YPO1089．pst、ymt），分析重组蛋白的抗原性。方法利用PCR技术扩增目的基因，PCR产物经纯化、双酶切后，与质粒载体pET-30a（＋）相连接并转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达目标蛋白，并进行10％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白免疫印迹分析其特异性，最后采用亲和层析法纯化诱导表达的融合蛋白。结果成功构建了pET—YPO1089、pET—pst和pET—ymt 3个重组表达质粒，经优化诱导表达条件，重组的rYPO1089、rPst和rYmt在大肠埃希菌中均得到了稳定高效地表达；免疫印迹结果表明重组的rPst可与鼠疫阳性血清发生特异性的免疫反应；目标蛋白经纯化后纯度可达95％以上。结论鼠疫菌的特异性抗原能够在原核蛋白表达系统中获得高效表达。rPst具有敏感且特异的免疫学特性，实验结果为开发新型鼠疫诊断试剂奠定了基础。
