摘要:
轮状病毒（rotavirus，RV）是犊牛腹泻的重要病因，笔者旨在建立基于恒温隔绝PCR（insulated isothermalPCR，iiPcR）技术现场检测牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）的方法。根据BRV和牦牛RVvP6基因序列，设计合成引物和探针，通过优化反应体系，配合商品化PetNAD核酸萃取试剂盒，建立了检测BRV和牦牛RV的iiPCR方法。结果显示该方法只能检出BRV和牦牛RV，不能检出牛冠状病毒、牛星状病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛大肠杆菌、牛沙门菌、牛艾美尔球虫、牛瑞氏隐孢子虫等无关病原；检测下限为96．6copies·μL^-1，重复性好；对30份牛腹泻样本和30份牦牛腹泻样本的检测结果表明，本方法对BRV的检出率是33．33％，对牦牛RV的检出率为73．33％，与文献报道的检测BRV和牦牛RV的方法的符合率分别为100%；对2016年四川阿坝藏羌自治州14个牧场的88份犊牦牛腹泻样本RV的检测结果显示RV核酸阳性检出率为98．86％。本研究建立的BRViiPCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好，既可用于BRV检测，又可用于牦牛RV的检测；从核酸提取到报告检测结果仅需1h，操作方便，可现场使用，为BRV的现场快速诊断提供有力的工具。
