摘要:
目的：针对现有热原检测法存在的问题，研究建立体外混合新鲜人全血热原检测法。方法：本试验用来源于5个不同个体的混合新鲜人全血模拟人体，将其分别与热原标准品（细菌内毒素）、受试品溶液进行孵育，通过酶联免疫吸附试验（enzyme—linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测并比较其孵育体系中相关内热原（主要为细胞因子，如IL-1β、IL-6、TNF—α）的含量，从而反映受试品的致热活性及热原污染情况。结果：①本试验热原刺激全血分泌的细胞因子中，IL—1β、IL-6较TNF-α更灵敏，更适用于检测热原；②新鲜人全血-IL-1β、IL-6法可检测多种热原[如革兰氏阴性菌来源的细菌内毒素（1ipopo—lysaccharide，LPS）、革兰氏阳性菌来源的脂磷壁酸（1ipoteichoieacid，LTA）、真菌来源的酵母多糖（zymosan）]，其对上述热原的反应总体较家兔法灵敏；③新鲜人全血mIL-1β、IL-6法的最佳孵育时间为17～24h，所用全血应37℃保存，2h内使用；④新鲜人全血-IL-1β、IL-6法对细菌内毒素最低检测限分别为0．05EU·mL^-1和0．1Eu·mL^-1，两检测指标分别在LPS（0．05—1．6，0．1～1．6EU·mL^-1）范围内与LPS浓度问均有较好的量效关系；⑤初步结果表明全血法可应用于生物制品[如注射用重组人干扰α1b、重组人粒细胞集落刺激因子注射液、静脉注射用人免疫球蛋白（pH4）、冻干人用狂犬病疫苗（vero细胞）]、中药注射液（如双黄莲注射液）及化药注射剂（如注射用甲氨蝶呤）的热原检测中。结论：体外混合新鲜人全血热原检测法具有对热原的检测谱宽、灵敏度高、应用范围较广等特点，可将该方法作为现有热原检测法（家兔法、细菌内毒素法）的补充方法对其做进-步论证研究。
