摘要:
目的评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2 (hBMP-2)基因转染羊骨髓间充质干细胞(MSCs)后的成骨活性.方法实验分为3组:(1)hBMP-2转染细胞组,(2)半乳糖苷酶基因(βgal)转染细胞组,(3)未转染细胞组.从羊骨髓中分离培养MSCs,基因转染后利用免疫沉淀和Western blot方法检测BMP-2的表达,并在体外进行碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色、ALP定量测定、透射电镜观察.分别将细胞悬液注入裸鼠股后部肌内,分期进行X线和组织学检查.结果Western blot检测发现只有hBMP-2转染细胞组的MSCs表达并分泌hBMP-2.该组于转染后第12 d,ALP活性达高峰,与其它两组比较,差异有显著性意义;于16 d后出现钙结节,而其它两组未见.透射电镜观察见hBMP-2转染细胞组的细胞内粗面内质网、线粒体和溶酶体增多.裸鼠肌内注射细胞悬液后3周,hBMP-2转染细胞组即有异位成骨,6周时明显增多,其它两组仅见纤维组织形成或微量成骨.结论hBMP-2基因转染能诱导羊MSCs分化为成骨细胞,并在裸鼠体内诱导成骨.
