建泽泻法呢基焦磷酸合酶分子克隆、分布表达及生物信息学研究

《药学学报》 谷巍[1];吴启南[1];巢建国[1];席蓓莉[1];李琳[1];申修源[1]
摘要:
三萜类化合物是道地药材建泽泻中的主要药效成分,在癌症治疗方面有很大的应用潜力。法昵基焦磷酸合酶(FPPS)为三萜类化合物合成途径中的重要限速酶之一,本文运用同源克隆和快速cDNA末端扩增(RACE)技术相结合的方法,克隆了建泽泻刚)尸S基因的全长cDNA(accession no.HQ724508),FPPScDNA全长为1531bp,含有1个1032bp的开放阅读框,编码343个氨基酸的蛋白,包含5个保守的功能域,其中两个富含天冬氨酸(DDXXD)。实时荧光定量PCR(QRT-PCR)结果显示建泽泻FPPS基因在各器官中均有表达,10月至12月上旬相对表达量呈上升趋势,后下降,其中叶片表达量较高,块茎、根、叶柄表达量相对较低。高效液相(HPLC)分析结果表明不同生长期建泽泻主要药效成分23-乙酰泽泻醇B变化趋势与FPPs基因表达量变化一致,初步证明FPPS是泽泻醇类化合物合成途径中的重要调控位点。本研究为利用植物基因工程改善中药材品质提供科学依据。
建泽泻 , 法呢基焦磷酸合酶 , 分子克隆 , 实时荧光定量PCR , 23_乙酰泽泻醇B
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