摘要:
烟草碱性β－1，3－葡聚糖酶具有较强的抗真菌病害等作用。本研究根据烟草Samsun与抗真菌作用有关的碱性8—1，3－葡聚糖酶基因序列设计引物，以烟草（Nicotiana tabacum）品种Xanthi NN基因组DNA为模板，进行PCR扩增，后将扩增产物与pUC57－T载体重组，再以该重组体转化大肠杆菌DHSα，在对阳性克隆进行鉴定后测序，并对其编码酶蛋白进行了一级、二级、三级结构及蛋白质同源性比较等生物信息学分析。研究结果表明，该基因全长1868bp，包含2个外显子和1个内含子；除终止密码子外，共编码359个氨基酸（GenBank登录号：EU867448）。该酶分子量为28．4kDa，pI为9．72，是一个碱性蛋白；具有多个螺旋、转角、延伸链和无规卷曲等二级结构，其中α－螺旋占35．65％，β－转角占5．57％，延伸链占19．22％，无规卷曲占39．55％；三级结构同源建模预测显示，它与香蕉（Musa supientum）β－1，3－葡聚糖酶（PDB number 2cygA）具有60％的一致性；推测该酶蛋白与颠茄（Atropa belladonna）、马铃薯（Solanum tuberosum）等茄科植物的β－1，3－葡聚糖酶编码序列同源性分别达到89％和81％。本研究结果为进一步开展烟草抗真菌的β—1，3－葡聚糖酶的基因工程研究奠定了重要基础。
