摘要:
背景与目的：癌细胞分泌蛋白是潜在的血清标志物，而且对肿瘤的早期筛选也具有重要意义。因此，系统、全面地研究肿瘤细胞分泌蛋白对于肿瘤血清标志物的筛选具有重要意义。本研究旨在鉴定肺癌细胞分泌蛋白，为肺癌血清标志物筛选提供实验依据。方法：用含胎牛血清的RPMI-1640培养液培养非小细胞肺癌细胞系A549细胞，收集A549细胞培养液中的蛋白及胎牛血清培养液中的蛋白（对照）进行蛋白双向电泳．应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。筛选出人属的蛋白质点后，应用RT—PCR方法检测其在肺癌组织及配对远处肺组织中的表达差异；并检测培养液及血清中锰-超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，Mn—SOD）水平。结果：鉴定出人属的蛋白质点14个，包括肌动蛋白、α烯醇酶（alpha enolase，ENO1）、Mn—SOD、谷胱苷肽S转移酶P（glutathione S-transferase P，GSTP1—1）、二氢二醇脱氢酶（dihydrodiol dehydrogenase，DDH）、磷酸甘油酸变位酶1（phosphoglycerate mutase 1，PGAM1）、葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体（glucose—dependent insulinotropic protein receptor，GIPR）、肽基脯氨基顺反异构酶（peptidyl—prolyl cistrans isomerase A，PPIA）、磷脂酰乙醇胺结合蛋白（phosphatidylethanolamine binding protein，PEBP）、蛋白基因产物9．5（ubiquitin carboxyl—terminal hydrolase isozyme L1，PGP9．5）、peroxiredoxin 1（PDX1）、galectin-1及专利蛋白W00222660等。RT—PCR检测示ENO1、DDH、PEBP、PGP9．5、PDX1、PGAM1、PPIA在肺癌组织中高表达。酶活性检测发现A549培养液中存在Mn—SOD，且发现非小细胞肺癌患者血清中有高水平的Mn—SOD。结论：本研究首次对非小细胞肺癌细胞的分泌蛋白进行了鉴定：发现多种高表达的非小细胞肺癌分泌蛋白基因．其中首�
