摘要:
目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程. 方法以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体,应用嗜硫色谱柱HiTrap IgY Purification HP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性;采用Lowry氏法测定蛋白含量;采用SDS-PAGE法测定相对分子质量(Mr)及鉴定抗体纯度.结果母鸡初次免疫第9天即有抗体产生,初次免疫60 d后抗体效价超过1∶100 000,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后,经SDS-PAGE检测为电泳纯, 纯化后抗体效价较纯化前提高4倍,每枚蛋中平均可获得较纯抗体97.5mg.动物体外中和试验表明,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击. 结论研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础,同时也促进其他抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制.
