摘要:
为了弄清景天酸植物芦荟的耐盐、耐旱机理,应用抑制性消减杂交技术,构建了库拉索芦荟的盐诱导组织与正常组织差异表达的cDNA消减文库,并做了初步鉴定.分别从库拉索芦荟的正常叶片组织及高盐诱导叶片组织中提取poly(A)+RNA,依次合成单链及双链cDNA,酶切成平均大小为400～600bp的片段;将高盐诱导组织cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与正常组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR;获得的产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.经检验证明,构建的cDNA消减文库具有很强的消减效率,非特异性cDNA片段被有效地消减,而特异表达的cDNA得到富集.所构建的库拉索芦荟高盐诱导组织cDNA消减文库为进一步大批量筛选、克隆高盐特异性表达的未知新基因奠定了基础.
