摘要:
目的在构建核转录因子-κB（NF-κB）通路报告基因模型后,研究竹节香附素A（RDA）抗炎的作用及其作用机制。方法用双荧光素酶报告基因技术,以p NF-kappa B-Luc（p NF-κB-Luc）、pr L-tk质粒转染RAW 264.7细胞,脂多糖（LPS）为激活剂,构建靶向NF-κB通路的报告基因模型,RDA和吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）分别给药验证模型。空白组给予空白培养基,模型组给予含LPS的培养基,对照组给予含PDTC的培养基,实验组给予含RDA的培养基。用Western-blot技术检测RDA对细胞蛋白p65和IκBα表达的影响。结果当LPS浓度为10μg·m L-1,转染试剂量为2μL时,成功构建靶向NF-κB通路的报告基因模型。RDA能够降低转染后细胞内p65和IκBα亚基的磷酸化,显著抑制NF-κB信号通路。结论本文构建的模型具有快速、稳定、特异、高通量等特点,可用于抗炎活性成分筛选,确认RDA的抗炎机制与NF-κB通路有关。
