摘要:
目的：测定和分析不同产地野生铁皮石斛样品的rDNA ITS序列，探讨利用ITS序列推测铁皮石斛样品产地来源的可行性。方法：提取总基因组DNA，使用通用引物ITS5F／ITS4R进行PCR扩增，产物经电泳检测、纯化和测序后用Sequin 11．0提交GenBank。用Bioedit 7．0中的Clustal W对GenBank中包括本研究提交的11条在内的所有33条铁皮石斛的ITS序列进行多重序列比对，随后以金钗石斛和密花石豆兰为外群，用邻接法构建NJ系统发育树。结果：从所有测定的ITS序列中选择11条提交GenBank，获得登录号JF803235～JF803245。所有铁皮石斛经比对后共发现645个同源位点，9个信息位点（ITS1区3个，5．8S区4个，ITS2区2个）。系统发育分析发现，金钗石斛和密花石豆兰位于树的基部，另外32条铁皮石斛共同形成单个大的分支，未发现产地来源与系统树的拓扑结构之间存在对应关系。结论：由于缺乏完善的铁皮石斛标准品及其DNA参考序列的提交标准，同时单个ITS序列仅能提供有限的系统发育信息位点，因此通过ITS序列分析的方法推测铁皮石斛样品的产地来源目前尚不具有可行性。
