摘要:
目的：建立并优化多伞阿魏简单重复序列区间（ISSR）一聚合酶链反应（PCR）体系。方法：通过单因素试验确定影响多伞阿魏ISSR—PCR扩增结果的Mg^2＋、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶、DNA模板最佳水平范围。对Mg^2＋、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA进行5因素4水平的正交试验，优选最佳ISSR—PCR体系条件。ISSR—PCR扩增结果用SPSS18．0统计软件分析。结果：不同水平的因素对PCR均有明显影响．其中Mg^2＋、dNTPs、引物影响最大。多伞阿魏ISSR．PCR最佳反应体系为：在50μl的反应体系中含有10×Taq Buffer5lal、Mg^2＋2．0mmol／L、dNTPs0．4mmol／L、引物0．4gmol／L、TaqDNA聚合酶1．75u／50μl、DNA模板0．25ng／gl。在此基础上．从100条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。结论：建立的多伞阿魏ISSR—PCR体系具有较高的稳定性和重现性，可为进一步利用ISSR技术进行多伞阿魏遗传多样性分析、不同种源鉴定及亲缘关系分析提供基础。
