武汉大学中南医院刘松梅团队为HBV检测提供新技术

2018年4月，武汉大学中南医院刘松梅教授团队，在爱思唯尔旗下The Journal of Molecular Diagnostics期刊发表研究论文。

论文题目为“A Highly Sensitive and Robust Method for Hepatitis B Virus Covalently Closed Circular DNA Detection in Single Cells and Serum”。论文介绍了他们建立的cccDNA选择性微滴式数字PCR（ddPCR）方法适用于单细胞、临床血清和肝脏组织等多种样本的检测，并能够早期诊断肝细胞肝癌（HCC）和监测抗病毒治疗效果。

ddPCR检测单细胞cccDNA流程图

HBV感染是HCC的最主要病因之一，HBV携带者HCC发病率较非携带者高10倍以上，在乙肝肝硬化病人中更为严重。HBV的致癌作用具有累积效应，随着感染时间的推进和病毒载量的增加，HCC的发生率会升高。

cccDNA是HBV复制过程中的转录模板，在肝细胞内稳定存在。目前临床常用的核苷类似物主要针对HBV反转录过程降低HBV-DNA载量，无法清除肝细胞内的cccDNA，是导致HBV感染迁延不愈的主要原因。

近年来，随着靶向cccDNA的抗HBV治疗新技术和新药物的推出，迫切需要一种准确而灵敏的cccDNA检测方法来评价疗效。然而，由于血清cccDNA含量低，加上cccDNA与HBV-DNA的结构类似，为cccDNA检测带来巨大的挑战。本研究利用ddPCR灵敏度高、重复性好特点，联合特异性的引物和探针，实现单细胞和血清中cccDNA含量的准确检测。由于并不是每个肝细胞中都含有cccDNA, 因此，与肝脏穿刺组织检测相比，血清样本具有创伤性小、同质性高、易于获得等优势，更适于临床广泛应用，使血清cccDNA的检测能够成为常规项目。

另外，该研究还发现联合检测血清cccDNA和HBV DNA可以有效的区分HCC和肝炎、肝硬化。68例HCC患者中近90%为cccDNA阳性，而79例非HCC患者中只有53%为cccDNA阳性。而且，HCC患者血清cccDNA拷贝数明显高于非HCC患者，证实cccDNA是肝癌的风险因素，通过检测血清cccDNA可以实现肝癌的早期诊断。

由加拿大Alberta大学Fan Shen博士和芝加哥大学Huilung Sun博士发表的同期评论也强调了这项工作能够以非侵入性的方式实现HCC早期诊断和准确预测慢性乙肝进展为HCC。

cccDNA和HBV DNA可以区分

HCC患者和肝炎、肝硬化患者

文章来源：爱思唯尔Elsevier

图片来源：爱思唯尔Elsevier

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