摘要:
目的 研究过氧化物酶体增生物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor alpha，PPARα）的配体苯扎贝特对原代牛主动脉内皮细胞（bovine aorta endothelial cells，BAEC）一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthse，eNOS）基因表达的影响并探讨其机制。方法 分离和培养牛主动脉内皮细胞，采用Northern印迹法、Western印迹法检测苯扎贝特对BAEC eNOS mRNA和蛋白质表达的影响，采用定量PCR的方法及NO试剂盒检测苯扎贝特对eNOS mRNA半衰期及NO产生的影响；继而采用Western印迹法，给予不同的信号转导通路抑制剂研究苯扎贝特影响eNOS表达所通过的信号转导途径，此外，构建了由人eNOS启动子驱动的荧光报告基因，研究苯扎贝特对eNOS启动子活性的影响。结果苯扎贝特以浓度（50～200μmoL／L）依赖的方式明显上调BAEC细胞eNOS的mRNA和蛋白质表达（P〈0．05），并促进一氧化氮（nitric oxide，NO）的生成[对照组（14．97±1．29）μmoL／L，苯扎贝特不同浓度组（25．12±1．25）μmoL／L，（30．12±1．85）μmoL／L，（33．47±1．22）μmoL／L]，增强eNOS-set-1179位点的磷酸化表达（P〈0．05），但是对eNOS—thr-497位点的磷酸化表达几乎没有抑制作用，定量PCR证实苯扎贝特增加eNOSmRNA的半衰期（从3．1—6．1h），进一步的研究显示苯扎贝特以浓度依赖的方式增加入eNOS启动子驱动的荧光报告基因的荧光活性（相对的荧光活性在100μmoL／L和200μmoL／L组分别为4429．43±391．41，6187．5±307．53，对照组为3361．81±316．85），增加磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）的蛋白质表达（P〈0．05及P〈0．01），而PPARα、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，P13K）和MAPK抑制剂可明显逆转苯扎贝特对eNOS表达的上调作用（P〈0．01）。结论 苯扎贝特通过上调eNOS的蛋白质表达、促进eN
