摘要:
氧化葡糖杆菌（Gluconobacter oxydans）来源的山梨醇脱氢酶可催化N-羟乙基葡萄糖胺合成6-脱氧-15-氨基（N-羟乙基）-α-L-呋喃山梨糖，即合成降血糖药物米格列醇的关键中间体。本文采用适应性驯化策略，以甘油为唯一碳源，通过40g／L、60g/L、80g／L和100g／L甘油梯度连续传代培养，筛选获得了一株以甘油为碳源的高活力菌株G．oxydans A-3-D，扫描电镜结果表明该细胞表面褶皱较原始菌株有显著增加。在80g／L甘油培养基摇瓶培养24h后，菌体浓度为4．58g DCW／L，山梨醇脱氢酶的发酵体积酶活与比酶活分别为原始菌株G．oxydans ZJB-605的1．3倍及1．5倍。此外，在摇瓶培养条件下对影响催化反应进程的关键因素进行了考查，结果表明在摇瓶体系中，G．oxydans A-3-D的最适催化反应条件为80．0g／L底物、2．0g DCW／L菌体细胞、20mmol／L Mg^2＋浓度，15℃反应48h后底物转化率达到90．8％，6NSL累积浓度为72．6g／L，较G．oxydans ZJB-605有显著提升。
