摘要:
背景：骨髓间充质干细胞是一种存在于骨髓内的非造血干细胞，因其具有自我更新能力及多向分化潜能，且分离培养方法成熟，在组织器官修复及再生方面显示出良好的应用前景，将为终末期肝病的治疗如生物人工肝及肝细胞移植提供新的细胞来源，但目前人骨髓间充质干细胞向肝系细胞诱导分化培养体系尚不成熟。目的：观察肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联合应用诱导人骨髓间充质干细胞在体外向肝系细胞分化的可能性。设计：开放性实验。单位：南昌大学第一附属医院传染科与泌尿外科研究所。材料：实验于2004—07／2005—03在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成。所用骨髓由成年健康志愿者提供（均对本实验知情同意）。DMEM，F12培养基（Gibco公司）；表皮细胞生长因子，肝细胞生长因子，胰岛素，转铁蛋白，鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体，FITC-兔抗鼠IgG（Sigma公司）；碱性成纤维细胞生长因子（Invitrogen公司）；鼠抗人角蛋白18，19单克隆抗体（Chemicon公司）；胎牛血清（杭州四季青）。方法：以骨髓腔穿刺方式抽取成年健康志愿者髂后上棘处骨髓10mL，采用密度梯度离心法分离和反复贴壁法纯化骨髓间充质干细胞。取培养至4-8代细胞，消化后以10^7L^-1接种到放置20mm×20mm爬片的预先铺被有0．1％明胶的24孔板中，次日换液，改用无血清DMEWF12培养基（含20旧，L的表皮细胞生长因子和10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子）培养2d后．换成无血清DMEM，F12培养基（含20μg/L的肝细胞生长因子，10μg/L的碱性成纤维细胞生长因子，5mg／L的胰岛素，5mg／L的转铁蛋白）进行诱导分化，每3d换液1次，以未加入肝细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞作为对照组。骨髓问充质干细胞诱导培养过程中，放射免疫荧�
