摘要:
目的：探讨环磷酸腺苷葡甲胺（MCA）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）向心肌细胞分化的影响。方法：采用全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD71、CD45和CD44的表达情况。用含各浓度MCA的细胞培养液干预后：（1）MTT法测定MCA对细胞活性的影响;（2）ELISA法测定细胞内cAMP水平;（3）荧光定量RT-PCR测定BMSCs心肌特异性基因表达情况;（4）利用流式细胞术比较MCA和5-氮杂胞苷（5-Aza）的诱导分化率。结果：采用全骨髓贴壁培养法获得BMSCs,流式细胞术测定细胞表面抗原结果符合BMSCs标准。MCA抑制BMSCs细胞活性,表现为时间和剂量依赖性,其中10-2mol/L对细胞活性的抑制作用尤为显著。随着MCA浓度的升高细胞内cAMP浓度也升高。BMSCs经10-3 mol/L、10-4 mol/L和10-5 mol/L MCA干预后均有GATA-4、β-MHC和Cx43 mRNA的表达,其中10-3 mol/L MCA诱导干预3 d,能发挥最佳的诱导分化作用。给予PKA抑制剂H89干预后,GATA-4、β-MHC和Cx43 mRNA的表达量显著减少（P〈0.05）。流式细胞术测定MCA组诱导分化率略高于5-Aza组的诱导分化率（20.24%±1.02%vs 18.39%±0.58%,P〈0.05）。结论：MCA可以进入BMSCs细胞内,升高cAMP水平,抑制BMSCs活性,通过cAMP/PKA信号通路促进BMSCs表达心肌特异性基因。
