摘要:
槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物，临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制，我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡的作用。
材料与方法引进并培养人肺腺癌细胞系A549细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏PRMI-1640含药培养液与接种成功、呈对数生长的A549细胞共同培养24 h后，每6 h进行以下观察及测定（设阳性对照组羟基喜树碱100 μg/ml，共同孵育10～12 h后进行测定）［1］。（1）荧光染色：收集培养细胞，清洗并均匀涂片自然风干24 h，置于0.05 mg/L的Hoechst33258及0.1 mg/L的硫柳汞的无钙、镁的磷酸缓冲染色液中作用40 min，封片后荧光显微镜下观察、拍照、计数；（2）电子显微镜观察：同上收集细胞6×106，磷酸缓冲液（PBS）清洗，戊二醛固定，再经锇酸染色、缩水包埋、切片后透射电子显微镜观察照相记录；（3）流式细胞仪分析：同法收集、清洗、固定细胞2×106，离心后加入100 μl磷酸二氢钠/柠檬酸缓冲液室温震荡30 min，在离心的细胞中加入含100 mg/L 核糖核酸酶A（Rnase A）和25 mg/L 碘化丙啶（PI）的染色液1 ml在暗处4℃染色3 h，用FACSort流式细胞仪分析细胞周期。实验数据通过SPSS For Windows软件进行统计学分析。
