摘要:
目的研究观察健康成人24 h尿液细胞外囊泡（u EVs）数量、大小分布及个体间差异。方法利用液压透析滤过法分离9名健康成年人24 h u EVs,通过western blot（WB）和透射电镜（TEM）技术验证u EVs的分离效果,应用BCA蛋白定量法及纳米微粒跟踪分析技术分别对富集的u EVs样品进行蛋白定量测定和囊泡数量及大小分布的分析。结果 TEM下可见大小不等、形状不一的囊泡。WB技术检测到外泌体的标记物—人肿瘤易感基因（TSG101）。9名健康成人24 h尿液分离的u EVs样品蛋白定量范围为132.50~760.70 ng/m L。纳米微粒跟踪分析技术检测结果显示24 h u EVs数量为（3.56~5.12）×1012个,CV=14.23%。24 h分泌的u EVs中,直径在〈40 nm范围内的囊泡占所检测到的总囊泡数的0.04~0.69%,数量为（1.80~26.49）×109个;符合外泌体直径范围（40~100 nm）的囊泡占总囊泡数的22.07%~42.08%,数量为（1.00~1.77）×1012个。符合微囊泡直径范围（100~1000 nm）的囊泡约占总囊泡数的57.88%~77.85%,数量为（2.09~3.86）×1012个。结论新型液压透析滤过法能高效、便捷地实现大样本尿液u EVs的分离。健康成人分泌的24 h u EVs个体间差异较小,是u EVs相关研究较理想的标本来源。
