摘要:
目的：体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞,观察采用不同的换液频度与细胞增殖和生长的关系。方法：实验于2006-03/11在辽宁医学院解剖学实验室完成。①选取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带,由辽宁医学院附属第一医院提供,产妇及其家属均知情同意。②根据更换细胞培养液时间的不同,分为接种后每24h,48h,72h更换培养液组。③无菌条件下将脐带用预热的磷酸盐缓冲液充分洗涤去血渍,从脐静脉一端插入留置针,用预热的磷酸盐缓冲液冲净静脉腔血,止血钳夹闭另一端,采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮及内皮下细胞,取消化30min的细胞悬液进行贴壁培养,以1×10^8L^-1密度接种于24孔培养板中,每孔的细胞数和培养液量相同,按实验设计分组的时间方法更换培养液。④各组自培养24h开始,每天分别取各组细胞4孔,以噻唑蓝比色法测定生长曲线。并采用免疫细胞化学方法对分离的细胞进行表面抗原鉴定。结果：①间充质干细胞的形态学观察：原代培养1周,细胞以梭形细胞为主。传代培养2h细胞开始贴壁变形,24h基本完成贴壁,48h可见部分已贴壁的细胞开始分裂增殖,细胞形态多样,呈椭圆形、梭形、三角形等。5～7d贴壁细胞可见多核的成纤维细胞样。在细胞生长增生过程中,接种后每24h更换培养液组细胞增殖明显,生长状态均最好;接种后每48h更换培养液组次之;接种后每72h更换培养液组细胞增殖较慢,细胞生长状态也较差。②生长曲线：接种后每24h更换培养液组的细胞生长增殖较快,比接种后每48h及72h更换培养液组达到的同样细胞数平均提前2～3d（P〈0.05）;接种后每48h及72h更换培养液组之间差异无显著性意义（P〉0.05）。③间充质干细胞表面抗原特性：免疫细胞化学分析显示CD166呈阳性,vWF呈阴性。结论：胶原酶消化法体外分离获得的人�
