摘要:
目的应用比较蛋白质组技术,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制.方法应用Annexin Ⅴ和PI双染法,通过流式细胞术区分HT诱导K562细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段.并进一步运用比较蛋白质组的研究方法,对HT诱导K562细胞凋亡的相关蛋白进行"蛋白差异显示"、质谱鉴定和数据库查询.结果 10 μg/ml HT作用K562细胞5 h和24 h,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱,统计学分析表明,在凋亡晚期组中3个斑点消失,7个斑点表达量显著降低,10个斑点表达量显著升高;选择10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定,其中5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定,分别为角蛋白9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶(tryptophany1-tRNA synthetase,TrpRS)、RS和prohibitin.结论在凋亡细胞中TrpRS、RS和prohibitin 表达上调以及BTF3表达下调,主要影响核酸转录和蛋白合成.角蛋白9表达增加是一种凋亡抵抗反应.
