摘要:
目的 建立相对荧光实时定量法 （RT-QPCR 2-ΔΔCt）, 考察聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液临床Ⅰ期试验中给药后外周全血中2＇, 5＇-寡聚腺苷酸合成酶 （2＇, 5＇-OAS） 相对药前点的相对表达水平变化.方法： 根据GenBank中查询的2＇, 5＇-OAS的序列构建质粒, 并纯化定量作为方法标准品, 制作标准曲线及验证样品, 考察该方法的准确度及精密度; 采用RT-QPCR 2-ΔΔCt方法, 以个体药前样品为对照, GAPDH为内参, 比较考察给予聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液 （受试品160 μg/人） 与阳性对照药派罗欣 （180 μg/人） 后外周血中2＇, 5＇-OASmRNA表达变化倍数; 同时, 基于ELISA方法对2＇, 5＇-OAS蛋白浓度表达进行分析.结果： 2＇, 5＇-OAS标准曲线有相对较好的线性 （R2=0.99）,cDNA 2＇, 5＇-OAS与2＇, 5＇-OAS标准品的PCR产物熔解曲线温度-致, 说明引物特异性好.2个剂量组中mRNA表达水平均在20 h左右达到峰值, 其中160 μg剂量组中峰浓度较高.ELISA检测血清中2＇, 5＇-OAS浓度无明显变化.结论： 与传统蛋白水平检测的ELISA方法相比, RT-QPCR 2-ΔΔCt灵敏度较高, 可以作为-种检测外周全血中生物标志物的替代方法, 以给予药效学研究的临床支持.
