摘要:
利用Percoll密度梯度离心和多次滤膜过滤分离到适于分子生物学研究的水稻(Oryza sativa L.cv.Guichao 2)生活精细胞.借助RT-PCR和SMART技术构建了水稻精细胞的cDNA文库.初级文库的大小为1.58×106pfu,插入片段平均大小为980bp.103个随机挑选的克隆与DIG标记的水稻幼苗根、叶及二细胞时期花粉、成熟花粉、精细胞和授粉5～7 d的子房cDNA探针杂交表明,除少数克隆外,它们在上述器官中的表达情况很相似.10个随机挑选的克隆用来测序及分析,有4个克隆含有完整的开放阅读框.1个克隆与水稻Polyubiquitin(Rubql)mRNA高度同源.Northern杂交表明它在二细胞时期花粉、成熟花粉中的表达显著少于在根、叶和授粉子房中的表达.另一个克隆的开放阅读框编码与拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)AtRAD17同源的蛋白.这是第一次正式报道高等植物精细胞cDNA文库的构建,也是第一次从高等植物精细胞中分离到其表达的基因.
