摘要:
目的建立从脐带分离间充质干细胞的方法，并研究其生物学性状。方法脐带经酶消化后于DMEM—LG／F-12培养基中培养，倒置显微镜及电镜观察细胞形态学，细胞计数绘制细胞生长曲线，计数成纤维细胞集落形成单位（CFU—F），流式细胞仪测定细胞周期及细胞免疫表型，免疫组织化学染色及RT-PCR检测其体外诱导成脂肪和成骨分化的能力，RT—PCR检测其细胞因子的分泌，与脐血来源CD34^＋细胞共同培养检测其支持造血的能力。结果经酶消化后，每cm脐带可得到中位数为1．01×10^6的有核细胞，CFU-F产率为1／1609有核细胞，经贴壁传代可分离出成纤维样细胞，细胞倍增时间为（28．02±10．53）h。流式细胞仪分析细胞周期显示，〉80％的细胞处于G0／G1期，S＋G2＋M期的细胞仅占（13．04±4．31）％。免疫表型分析显示，CD13、CD29、CD44、CD105（SH2）、CD73（SH3）、CD166和MHC—1阳性，CD45、CD34、CD38、CD31和MHC-Ⅱ阴性。体外诱导实验证实，该细胞具有成脂肪和成骨分化的能力。R-PCR显示，该细胞表达干细胞因子、血小板生成素，酪氨酸激酶受体配基、白细胞介素-6、巨噬细胞集落刺激因子、白血病抑制因子、基质细胞衍生因子和血管内皮细胞生长因子，不表达白细胞介素-3。与脐血来源CD34^＋细胞共同培养2周可见鹅卵石形成区，共培养8周证实其支持长期造血能力。结论建立从脐带中分离间充质干细胞的方法，脐带是间充质干细胞的新的来源。
