改构的野生革耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定

《生物技术通讯》 杨建强[1];刘刚[1];汤国营[1];戴红梅[1];朱厚础[1]
摘要:
在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT.将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞.经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多.其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4.5时测得比活为3.68U/mg.根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600.
毕赤酵母 , 酶基因 , 活性鉴定 , 野生 , SDS-PAGE , cDNA序列 , 离子交换层析 , 凝胶过滤层析 , 相对分子质量 , PCR鉴定 , 突变基因 , 表达载体 , 重组质粒 , X-33 , 电击转化 , 活性重组 , 分泌表达 , ABTS , 核苷酸 , 漆酶 , 线性化 , PME , 转化子 , LCC , 培养液 , 酶蛋白
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