摘要:
在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT.将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞.经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多.其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4.5时测得比活为3.68U/mg.根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600.