摘要:
对柿(Diospyros kaki Thunb.)和君迁子(D.lotus L.)试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及再生植株遗传稳定性进行了研究.结果表明,试管苗在添加有蔗糖0.3 mol·L-1的改良MS培养基 (KNO3和NH4NO3减半)上,于低温6±1℃下锻炼6周后,切取侧芽茎尖1.5～2.0 mm在含蔗糖0.7 mol·L-1的改良MS培养基上预培养2 d,室温(20℃)下装载液(2.0 mol·L-1甘油+0.4 mol·L-1蔗糖)过渡20 min,0℃下玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol·L-1蔗糖)处理80 min,换成新鲜的PVS2后投入液氮保存1 d,40℃水浴化冻1 min,含蔗糖1.2 mol·L-1的改良MS培养基洗涤20 min,接种于含0.2 mg·L-1 CPPU、1.0 mg·L-1 BA、0.05 mg·L-1 IAA、500 mg·L-1 可溶性PVP、30 g·L-1蔗糖和7 g·L-1琼脂的改良MS培养基(再生培养基)的滤纸上,暗处理1 d后转移到新鲜的上述再生培养基中,暗培养1周后转到正常光下,再生率超过30%;再生植株通过细胞学和AFLP标记检测,没有发现核DNA含量、染色体数目和AFLP谱带的改变.该结果为柿属植物种质资源的长期保存提供了理论依据.
