摘要:
通过搜寻核酸数据库中柿属植物核苷酸序列,利用Sputnik程序查找微卫星,利用Primer Premier5.0软件设计特异微卫星引物,并对影响PCR扩增的Mg^2+.dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度,以及退火温度等因素进行优化。最终确定柿(Diospyros kaki)和君迁子(D.lotus)SSR-PCR最佳反应体系为:模板DNA30ng,Buffer 1×,Mg^2+2.5mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,TaqDNA酶1U,引物0.3μmol/L,反应总体积20μL,退火温度50℃。