摘要:
为拓宽油菜育种的基因资源库,改良油菜品种,以甘蓝型油菜（Brassica napus）花油3号下胚轴和芝麻菜（Eruca sativa）下胚轴为材料分离制备原生质体;然后采用PEG-高Ca^2＋-高pH法进行原生质体融合,当PEG浓度为35%,原生质体融合密度为5×10^5个/mL时,融合25min时,融合率可达18.2%。融合后在培养密度为1×10^5个/mL时,以附加1.0mg/L2,4-D＋0.5mg/L6-BA＋0.5mg/LNAA＋200mg/L肌醇＋300mg/L水解酪蛋白的改良的KM8p为融合体培养基,以0.1mol/L蔗糖＋0.2mol/L葡萄糖＋0.2mol/L甘露醇作渗透稳定剂进行液体浅层培养,效果较好,愈伤组织再生率最高为6.8%。将融合体再生的小愈伤组织转移至培养基（B5无机盐＋0.087mol/L蔗糖＋0.2mg/L2,4-D＋0.5mg/LNAA＋0.2mg/L6-BA＋0.5%Agar,pH5.8）上增殖培养,待愈伤组织长至直径为3-5mm时,及时将其转至分化培养基（MS无机盐＋0.087mol/L蔗糖＋0.1mg/LIAA＋0.8mg/L6-BA＋0.8%Agar,pH5.8）中诱导不定芽再生,芽分化率为35.7%。当不定芽长为2-3cm时,将其切下转入附加0.5mg/LIBA＋0.2mg/L6-BA的1/2MS生根培养基中诱导生根,14d左右即可形成再生植株,生根率可达88%。同时,以紫外线（60μW/cm^2）照射芝麻菜原生质体,进行不对称融合,照射2min的获得了愈伤组织和再生植株,照射4min的只获得愈伤组织,而照射5min以上的没有获得愈伤组织,但其愈伤组织再生、增殖及植株再生均不如对称融合。从细胞学鉴定的21块杂种愈伤组织上再生出16株杂种植株。
