摘要:
目的：对光果甘草黄酮代谢途径中的关键酶查尔酮异构酶（CHI）进行基因克隆和序列分析。方法：取新鲜光果甘草主根，立即投入液氮，作为提取RNA的植物材料；用植物RNA提取试剂盒提取光果甘草总RNA，用逆转录试剂盒对其逆转录得cDNA；根据文献报道的乌拉尔甘草CHI序列设计特异性引物，扩增光果甘草CHI基因并测序；用生物信息学软件对所得序列进行分析。结果：扩增得到22条光果甘草CHI基因cDNA序列，其编码区全长为690bp，编码229个氨基酸残基。DNAMAN比对表明22条光果甘草cDNA序列间存在16个变异位点，一致性为99．67％，可分为7种单倍型，其中单倍型1为主流单倍型，所占比重为45．5％；氨基酸序列间存在10个变异位点，一致性为99．38％。生物信息学分析表明光果甘草CHI基因编码蛋白为稳定性亲水蛋白，相对分子质量为24000，等电点为5．56～6．76，不含信号肽，无跨膜区，保守结构域包含一个查尔酮超家族结构域，二级结构以Ot螺旋和无规卷曲为主。MEGA5．0同源性分析显示光果甘草7种CHI单倍型间亲缘关系良好且与同属植物乌拉尔甘草的进化关系最近，与蕨类植物香鳞毛蕨的进化关系最远。结论：克隆了光果甘草CHI基因并对其进行了序列分析，为进一步探究CHI基因对甘草苷生物合成的分子调控机制奠定了基础。
