摘要:
目的对金龙胆草Conyzablinii3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因进行克隆及序列分析，并检测其是否可作为金龙胆草的内参基因。方法采用RACE技术克隆金龙胆草GAPDH基因的cDNA全长序列，利用DNAMAN、BLAST、MEGA等工具对序列进行生物信息学分析，并以其为内参进行半定量RT-PCR。结果克隆获得了1个全长1418bp的GAPDH基因，完整开放阅读框1020bp，编码340个氨基酸，命名为GLGAPDH。序列比对结果显示，金龙胆草的GAPDH基因与紫背天葵的同源序列相似性达到96％，与薇甘菊的同源序列相似性为93％。通过系统进化树分析发现其与紫背天葵的亲缘关系最近。半定量RT-PCR分析GLGAPDH作为内参基因在不同组织中表达稳定，扩增效果良好，重现性强。结论首次克隆了金龙胆草GAPDH基因的全长cDNA序列，并通过半定量实验验证了其可作为内参基因用于基因表达量分析，为金龙胆草次生代谢物合成过程中关键酶表达分析及调控机制的研究奠定了基础。
