摘要:
本文描述了用明胶半包埋法制备带背根脊髓薄片的实验步骤,和在脊髓背角记录由初级传入纤维介导的突触后电流的可视膜片钳法.手术制备一段带背根的脊髓标本,并用20%的明胶包埋在琼脂块上,再用振动切片机切片获得带背根的脊髓薄片.通过红外线可视的引导,在脊髓背角神经元上建立全细胞封接模式.在钳制电压为-70 mV条件下,记录自发的和背根刺激引起的兴奋性突触后电流.以传入纤维的传导速度与刺激阈值为指标,可以区分A样纤维与C样纤维兴奋性突触后电流.在钳制电压为0mV条件下,记录自发的和背根刺激引起的抑制性突触后电流.用5μmol/L的士宁或20μmol/L的荷包牡丹碱分离出γ-氨基丁酸能或甘氨酸能的抑制性突触后电流.用可视膜片钳方法可以准确测量脊髓背角神经元的突触后电流,从而研究初级传入突触的传递过程.更重要的是,在红外线可视观察的帮助下,建立膜片钳封接的成功率显著提高,同时也使记录研究脊髓背角深层神经元变得更加容易.本研究为探索初级传入突触传递过程提供了一个有效的方法.
