摘要:
目的：对靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell，CAR-T cell]进行构建，同时针对其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能展开评估。方法 以选择偏爱密码子技术对基因序列加以改造，从而使CAR分子表达效率得到提升，设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因，与此同时建立携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体pCDH-GPC3-CAR，感染T细胞；借助流式细胞术、Western blotting、实时细胞监测、ELISA技术分别对慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性及特异性进行检测。结果 双酶切pCDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒有分子质量与GPC3-CAR分子相一致的基因片段存在，顺利地完成了pCDH-GPC3-CAR慢病毒质粒的构建。表达GPC3-CAR分子的GPC3-T细胞占到了54.38％，被叫做GPC3-CAR-T细胞。在杀伤能力方面，此细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1更为显著[（78.96±4.76）％ vs （6.87±3.15）％，P＜0.01]。与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平高于Mock组 [（21 371.4±1 808.3） vs （152.8±12.5） pg／ml，P＜0.01]，这或许是导致其能够对肝癌细胞造成强力杀伤的一个关键机制。结论：靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞不但能够对IFN-γ细胞因子进行高水平分泌，而且还可以达成对GPC3阳性肝癌细胞的特异强效杀伤，这对于其临床前及临床研究打下了牢靠的根基。
