摘要:
目的通过体外转录获得西尼罗河热病毒保守区基因的RNA片段，为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计西尼罗河热病毒基因保守区克隆引物，PCR从合成的基因DNA获得相应片段，连接至质粒PGEM．T-easy上并筛选阳性重组质粒，测序鉴定后酶切线性化，用T7RNA聚合酶进行体外转录，得到固定长度的RNA片段，DNase酶处理后测定浓度，梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含西尼罗河热病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段，质量浓度分别为352．6ng／μL，RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为西尼罗河热病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
