摘要:
目的:研究siRNA(small interference RNA)对bcl-2基因表达的抑制作用. 方法: 依据Ambion公司在网上提供的设计软件,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入U251细胞株,以未转染细胞以及bcl-2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制以及流式细胞仪检测细胞周期的改变,用RT-PCR和免疫组织化学法检测siRNA对bcl-2表达的抑制作用. 结果: MTT显示各时点细胞生长以及存活率,在siRNA 2、3、5、6与siRNA 1、4组以及对照组和脂质体组间均有显著差异(P<0.05).siRNA 1、4组与对照组和脂质体组也有差异(P<0.05).siRNA 1-6组与反义组在24和48 h均有显著差异(P<0.05),在72 h无显著差异(P>0.05).RT-PCR以及免疫组织化学法显示,siRNA 2、3、5、6组bcl-2基因表达明显低于对照组、脂质体组、反义组以及siRNA 1、4组(P<0.05).流式细胞仪检测细胞周期结果显示, siRNA 1-6组以及反义组细胞阻滞于S期. 结论: 体外转录合成的siRNA可抑制U251细胞bcl-2基因的表达,效率可达50%以上.
