摘要:
目的克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段,表达重组抗原,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断,并用患者血清对其诊断价值进行评价.方法 PCR扩增目的基因片段与质粒载体pET28a(+)连接构建表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白,用镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(NI-NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果.结果获得两个高效表达克隆ReEm18-1和ReEm18-2.其中ReEm18-1与预期序列一致,ReEm18-2为同一序列,但有27 bp的核苷酸缺失.两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量(Mr)分别为28 000和26 000.对101例AE、47例细粒棘球蚴病、30例囊尾蚴病、10例肝癌、9例血吸虫病和40名健康人共237份血清进行ELISA检测,结果显示,ReEm18-1和ReEm18-2重组抗原对AE血清诊断的敏感性为86.1%和90.1%、特异性为93.4%和94.1%、阳性预期值为90.6%和91.9%、阴性预期值为90.1%和92.8%、诊断效率分别为90.3%和92.4%;对58例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度(A)的相关性比较分析结果表明,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性.结论Em18重组抗原对AE具有特异性诊断价值,检测的抗体水平在早期与病程有较好的相关性,对筛查早期患者有一定应用价值.ReEm18-2与ReEm18-1两者的效果相似.
