摘要:
目的：体外分离培养人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞（RTSC），建立RTSC的鉴定方法。方法：新鲜Rb组织经酶消化法获取单个瘤细胞，接种于无血清化学限定培养基培养。对培养7-15d的神经样球体，分别进行克隆形成、增殖能力、分化能力等干细胞特性鉴定；采用RT-PCR及免疫荧光等方法对RISC及其分化细胞的特性进行鉴定。结果：Rb肿瘤在无血清培养基中可以形成神经球体样肿瘤球体，后者可以多次传代，具有自我再续能力。RTSC来源的神经球体表达神经干细胞或视网膜早期发育的相关基因Nestin、CD133、Bmi-1、Pax6、RX及Chx10。在分化培养基上，肿瘤球体内细胞可以向神经元和胶质细胞分化，形成神经网络样结构，该分化细胞部分表达GFAP、MAF2、GAP43、PKC-a、Syntaxin及Recoverin等。RTSC分化后的神经样细胞为谷氨酸能神经元细胞。结论：本结果揭示Rb中存在具有自我增殖及分化能力的视网膜前体细胞样的肿瘤干细胞。此类细胞可能是Rb恶性增殖的根源，也将成为Rb治疗的新靶点。
