摘要:
目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对胆囊癌肿瘤血管生成的抑制作用及其机制。方法通过建立荷瘤裸鼠胆囊癌模型和胆囊癌GBC-SD细胞模型分别进行血管生成随机干预实验，实验分对照组、5氟尿嘧啶（5-FU）组、不同浓度NCTD组、内皮抑素（ES）组、NCTD＋5-FU组和NCTD＋内皮抑素组，每组10只。应用病理学检查、流式细胞术（FCM）、免疫组织化学SABC法、CD34染色和聚合酶链反应（PCR）技术，观测荷瘤大小、凋亡率、瘤周血管形态和微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素2（Ang-2）和血管生成抑制因子（TSP）、金属蛋白酶-2组织抑制因子（TIMP2）表达。结果（1）NCTD组裸鼠荷瘤MVD（4．1条±1．4条）明显少于5-FU组（15．8条±5．9条）和对照组（17．6条±3．2条，均P〈0．01）；与ES组（4．5条±2．1条）比较，差异无统计学意义。NCTD组显微镜下见凋亡、片状坏死肿瘤细胞周围有血管破坏现象。荷瘤MVD与荷瘤体积（r=0．985，t=8．069，P〈0．05）、细胞增殖／凋亡比（r=0．956，t=4．61，P〈0．05）相关。（2）NCTD组荷瘤细胞VEGF（32．3％±5．6％）、Ang-2蛋白表达（22．6％±3．7％）均明显低于对照组（44．7％±4．2％及36．8％±8．7％）和5-FU组（41．0％±4．4％及31．7％±1．8％）（均P〈0．01），TSP（166．9％±8．9％）、TIMP2（180．4％±4．1％）蛋白表达则明显高于对照组（14．7％±1．1％及56．7％±0．8％）和5-FU组（99．1％±2．8％及100．6％±18．4％）（均P〈0．01），与ES组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。VEGF、Ang-2表达与荷瘤MVD呈正相关，TSP、TIMP2表达则呈负相关。（3）NCTD应用后逆转录（RT）-PCR检测显示，GBC-SD细胞VEGF mRNA（578 vs 435）、Ang-2 mRNA（236vs139）特异性条带净面积（Pix）明显降低，TIMP2 mRNA则明显增高（191vs421），与裸鼠荷瘤血管生成相�
