摘要:
目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对胆囊癌肿瘤血管生成的抑制作用。方法通过建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）新生血管生成模型和裸鼠胆囊癌荷瘤模型，分别对HUVEC、CAM新生血管和裸鼠荷瘤血管生成进行随机干预实验，实验分对照组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组、不同浓度NCTD组、内皮抑素（ES）组、NCTD＋5-Fu组和NCTD＋ES组。应用病理学检查、FCM、免疫细胞化学SABC法、CD34染色和Hoechst 33258荧光染色、荧光显微镜等，观测、分析HUVEC的凋亡形态改变、凋亡率，CAM血管被抑制、破坏作用，荷瘤裸鼠胆囊癌微血管密度（MvD）、瘤周血管破坏形态。结果（1）NCTD对HUVEC的ED50为0．352g／L。NCTD组HU—VEC凋亡率明显高于对照组[（76．86±5、67）％VS（4．60±1．45）％，P〈0．05]，荧光显微镜下见血管内皮细胞不同程度凋亡；NCTD和ES一样，随时间延长其诱导血管内皮细胞凋亡作用加强，呈时间效应关系。（2）在CAM实验中，NCTD浓度与其抑制CAM血管生成作用呈正相关（r=0．89，t=3、45，P〈0．05），即随浓度增高NCTD鸡胚存活率下降（55％～60％比80％，P〈0．05）、CAM毛细树状血管减少、血管生成抑制率增高（90．9％～100．0％比0～53％，P〈0．05），与ES差异无统计学意义。NCTD对CAM血管生成抑制作用强。（3）NCTD应用后，荷瘤MVD与5-Fu组（4．12±1．40比15．80±5．90，P〈0.01）、对照组（4.12±1．40比17．60±3．20，P〈0.01）比较明显减少，与ES差异无统计学意义（P〉0．05）。显微镜下见凋亡、片状坏死肿瘤细胞周围有血管破坏现象；且荷瘤MVD与荷瘤体积（r=0．985，t=8．069，P〈0．05）、细胞增殖／凋亡比（r=0.956，t=4．61，P〈0．05）相关。结论NCTD可有效抑制、破坏胆囊癌肿瘤血管生成，进而有效抑制胆囊癌增殖与生长．
