摘要:
目的在原核系统中表达登革病毒1-4型膜蛋白B区的型特异性抗原，开发登革病毒感染系列酶联免疫诊断试剂盒。方法利用PCR技术从登革病毒标准株扩增膜蛋白B区抗原基因，通过酶切消化后连接到表达载体上，转化大肠埃希菌BL21 Star^TM（DE3），经IPTG诱导表达，表达产物用液相层析法纯化；并用Western Blot（WB）及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测。用重组抗原制备登革病毒抗体酶联免疫诊断试剂，用该试剂对广东省登革热监测血清库样本的登革病毒抗体测定，并与进口登革IgM抗体检测试剂（澳大利亚PanBio）进行对比分析。结果表达产物具有较高的浓度、纯度和良好的活性。重组抗原对16份登革病毒分离阳性血清中的登革病毒IgM抗体有良好的抗原反应性（A均≥0.29，cut-off值为0.2）；对2004年中山市登革热疫情65份患者血清样本的IgM、IgG检出率均达100%（65/65、28/28）。用重组抗原制备的试剂检测了617份登革热疑似病例血清中的登革病毒IgM抗体，阳性率为70.66%，其中对123例临床确诊登革热病例血清的IgM阳性率为90.24%；检测1 675份登革热监测血清样本的IgG抗体，阳性率为9.19%；用该试剂与进口试剂分别对34份临床确诊的登革热病例的血清样本进行检测，两者IgM抗体阳性率分别为91.18%、73.53%。结论制备的登革病毒重组抗原可用于研制登革病毒感染酶联免疫诊断试剂盒。
