摘要:
目的 优化和建立稳定的金槐ISSR-PCR反应体系并筛选出稳定的ISSR-PCR引物。方法 采用L16（45）正交设计方法,以d NTP、Tap酶、ISSR引物、Mg2＋浓度和模版DNA 5个影响因素进行4水平优化试验,并对反应体系进行验证;采用优化所得的最佳反应体系进行引物筛选。结果 确立了金槐的最佳ISSR-PCR反应体系：即在25μl总体积反应体系中包含10×Buffer2.5μl,Mg Cl22.5mmol·L-1,ISSR引物0.6μmol·L-1,d NTPs0.25mmol·L-1,Taq酶1.0U,模板DNA约50ng。通过最佳体系进行引物筛选,获得11条适宜金槐扩增的ISSR引物。结论 经过12份金槐样品的验证,证明所建立的体系稳定可靠,可用于金槐遗传多样性、指纹图谱和标记辅助育种等方面的研究。
