摘要:
用带PBI121质粒的农杆菌LBA4404菌株转化泗棉3号胚性愈伤组织，获得的再生植株进一步对gus和nptⅡ基因进行PCR跟踪检测，共得到97株阳性转基因植株。GUS组织化学检测发现，97株转基因幼苗中有10株GUS检测阴性，嫁接后，只成活一株。利用来源于同一愈伤系的GUS检测阳性植株作为对照，对这一GUS检测阴性的植株进行gus基因沉默机理研究。Southern分析表明，该GUS检测阴性植株与GUS检测阳性植株有相同拷贝数。GUS组织化学检测和RT—PCR分析显示，gus基因在GUS检测阴性植株中没有表达，而nptⅡ基因在这两株转基因棉花中都表达。用限制性内切酶-PCR法分析35S启动子区甲基化发现：GUS检测阴性植株35S启动子区TATA box的HapⅡ／MspⅠ酶切位点发生甲基化，而GUS检测阳性植株该位点没有甲基化。以上研究表明，这株gus沉默的转基因棉花可能是由于其35S启动子区甲基化引起的。
