摘要:
为了有效预防肠毒素性大肠杆菌引起的犊牛和羔羊腹泻，利用基因工程技术构建了融合基因K99-ST1及其原核表达载体，并对融合蛋白进行了初步免疫原性分析。结果显示，将PCR获得的K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段借助pUCm-T载体，成功构建重组质粒pUCm-K99ST1，从而获得融合基因K99-ST1；使用EcoRⅠ＋SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET30a中，成功构建表达载体pET—K99-ST1；将该表达载体转入表达菌株BL21（DE3）中，经IPTG诱导得到大小约31000的蛋白；Western blotting显示，融合蛋白可以特异的与K99阳性血清反应；将BL21（DE3，pET-K99-ST1）诱导表达后免疫兔，ELISA检测K95抗体水平较高，乳鼠灌胃试验显示该菌株免疫后产生ST1抗体。这表明本试验已成功构建大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株BL21（DE3，pET-K99—ST1），该菌株具有良好的免疫原性，为大肠杆菌K99-ST1双价基因工程疫苗开发奠定了基础。
