猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

《中国农业科学》 刘建杰[1];何启盖[1];陈焕春[1];吴斌[1];徐晓娟[1];刘军发[1];唐先春[1];贝为成[1]
摘要:
根据胸膜肺炎放线杆菌S4074菌株毒素I的序列,设计了1对引物,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因(apxICA),扩增的DNA片仅大小为3640bp(4687~8326bp),将其克隆到pMD18-T载体中,酶切鉴定和序列测定后,进一步将其插入pET-28a中构建了原核表达载体,SDS—PAGE和Western blotting分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板,建立了检测毒素I血清抗体的ELISA方法。临床应用表明,该方法可用于APP强毒株感染的检测。
猪 , 胸膜肺炎 , 放线杆菌毒素 , I基因克隆 , 基因表达 , ELISA检测
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